类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统BPSS1395蛋白表达及其抗体制备与鉴定

• 作者: 方瑶 李倩 毛旭虎 胡志强 胡艺 韩丹 马腾飞
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 类鼻疽杆菌 Ⅲ型分泌系统蛋白 抗体制备与鉴定
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 941-945
• 页数: 5页
• 分类号: R341|R378.99|R392-33
• 语种: 中文
• DOI: 10.16016/j.1000-5404.201611152

摘要

目的 重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1395,利用其抗体检测该蛋白在细菌中的分布.方法 以pET-22b为表达系统,采用DNA重组技术在大肠杆菌中表达BPSS1395蛋白;用纯化重组蛋白免疫新西兰大白兔,Western blot及ELISA法鉴定其免疫学性质;以制备的抗血清Western blot分析该蛋白的亚细胞定位.结果 从类鼻疽杆菌BPC006株基因组DNA中PCR得到了BPSS1395目的基因,并成功构建pET-22b-BPSS1395重组质粒,转化到E.coli宿主菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达、纯化得到了相对分子质量为32×103的高纯度BPSS1395蛋白,制备的兔抗血清ELISA效价均高达1:1280000,并能与目的蛋白发生特异性抗原抗体反应.亚细胞分离后BPSS1395在类鼻疽杆菌中主要定位于细胞质.结论 重组表达了具有生物活性的BPSS1395蛋白,制备了其特异性多克隆抗体,证明了该蛋白定位于细胞质.