兔关节软骨细胞的体外培养及凋亡相关基因在传代细胞中的表达

• 作者: 厉蓓 周叶 朱立 王晓楠 高越
• 来源期刊: 浙江医学
• 关键词: 软骨细胞 体外培养 烟酰胺磷酸核糖转移酶 信息沉默因子1 传代
• 年，卷（期）: 2017,（23）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2101-2105,后插2
• 页数: 6页
• 字数: 4249字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.23.2017-2027

摘要

目的 验证体外Ⅱ型胶原酶消化法培养兔软骨细胞的可行性,探讨凋亡及抗凋亡基因在软骨细胞传代中的变化,寻找关节软骨退变老化研究的最适宜靶细胞.方法 在无菌条件下取6周龄新西兰大白兔双侧膝关节软骨,采用Ⅱ型胶原酶消化并机械吹打的方法分离关节软骨细胞并进行原代、传代培养;形态学观察时采用甲苯胺蓝染色法对关节软骨细胞进行鉴定;RT-PCR法检测P0～P4代软骨细胞烟酰胺磷酸核糖转移酶[NAMPT)、信息沉默因子1(Sirt1)、p53、Bax基因的mRNA相对表达量,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各代关节软骨细胞增殖情况.结果 显微镜下观察兔原代软骨细胞大多呈透亮椭圆形、短梭形、多角形特征,72h全部贴壁生长.甲苯胺蓝染色显示培养的软骨细胞细胞质染成浅蓝色,细胞核染成深蓝色;前3代软骨细胞表型稳定,增殖力良好;连续培养至P4代后,绝大部分细胞变为长梭形和不规则形状.随着软骨细胞的传代,NAMPT的表达量逐渐下调.与P0代软骨细胞相比,Sirt1的表达量在P1代细胞中明显上调,在P2代细胞急剧下降至P0代以下,在P3～P4代细胞中Sirt1的表达量逐渐下调.凋亡基因p53和Bax的表达量随着软骨细胞的传代而上调.前3代软骨细胞增殖差异无统计学意义(均P＞0.05);在培养到第4～7天时,P1～P3代与P4代软骨细胞增殖差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用体外Ⅱ型胶原酶消化法培养兔关节软骨细胞是切实可行的.随着软骨细胞的传代,抗凋亡基因NAMPT、Sirt1的表达逐渐下调,凋亡基因p53、Bax的表达逐渐上调.P1～P3代关节软骨细胞作为研究关节软骨凋亡的细胞体系是合适的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高越	杭州市第一人民医院综合保健科	29	125	5.0	10.0
2	周叶	杭州市第一人民医院综合保健科	10	43	4.0	6.0
3	王晓楠	杭州市第一人民医院综合保健科	14	11	3.0	3.0
4	朱立	杭州市第一人民医院综合保健科	3	10	2.0	3.0
5	厉蓓	杭州市第一人民医院综合保健科	3	3	1.0	1.0