新疆辣椒CMV基因组序列分析与CP基因多克隆抗体制备

• 作者: 刘丽 刘贞 周东 许鹏程 郑银英
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 黄瓜花叶病毒 序列分析 外壳蛋白 原核表达 蛋白质印迹检测
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 88-94
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0206

摘要

克隆新疆辣椒LJ-10 CMV基因组片段,并进行序列分析,构建CMV CP基因的原核表达载体,并制备CP基因的多克隆抗体.利用RT-PCR技术,克隆新疆辣椒LJ-10 CMV的RNA1(3357 nt)、RNA2(3042 nt),RNA3(2212 nt)全基因组片段,与GenBank上登陆的CMV亚组IA、亚组IB、亚组Ⅱ分离物进行序列分析和系统进化树分析.将LJ-10 CMV CP基因克隆到原核表达载体pET-22b中,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达纯化,以纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子,制备CMV特异性抗血清,并进行间接ELISA和Western blotting分析.结果显示,成功克隆了新疆辣椒LJ-10 CMV的RNA1、RNA2、RNA3全基因组片段,序列分析及系统进化树分析表明,该分离物属于CMV亚组IB.成功构建了LJ-10 CMV CP基因的原核表达载体pET-CMV-CP,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导获得了与预期大小一致的分子量约为27 kD的重组蛋白,制备了CMV的特异性抗血清.间接ELISA和Western blotting分析表明,制备的抗血清效价为1:500-1000.新疆辣椒LJ-10 CMV分离物属于CMV亚组IB,成功构建了LJ-10 CMV CP基因的原核表达载体,制备了相应的多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑银英	石河子大学生命科学学院	17	69	4.0	7.0
2	刘丽	石河子大学生命科学学院	24	212	8.0	14.0
3	许鹏程	石河子大学生命科学学院	2	1	1.0	1.0
4	周东	石河子大学生命科学学院	3	1	1.0	1.0
5	刘贞	石河子大学生命科学学院	2	1	1.0	1.0