草莓轻型黄边病毒外壳蛋白抗原表位预测、克隆、表达及其免疫原性分析

• 作者: 李印武 杨菊梅 潘博 王永刚 邓子兵 马建忠 魏艳
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 草莓轻型黄边病毒 外壳蛋白 抗原表位预测 原核表达 质谱鉴定 免疫原性
• 年，卷（期）: 2017,（16）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 71-78
• 页数: 8页
• 分类号: Q785|Q786
• 字数: 8300字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201716011

摘要

应用IEDB、DNAStar、DNAMAN和SnapGene等生物信息学工具对草莓轻型黄边病毒外壳蛋白的氨基酸残基序列进行分析.选择一段抗原性较强的肽段(位于外壳蛋白27～38氨基酸残基处),依据大肠杆菌(Escherichia coli)的密码子偏好性化学合成了该肽段的DNA编码序列(AE).AE片段克隆至E.coli表达载体pET32a(+)的EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ位点,获得重组质粒pET32a(+)-AE.含AE片段的开放阅读框长561 bp,编码了一个187氨基酸残基的重组融合蛋白,理论分子质量为20.29 kD.重组质粒pET32a(+)-AE分别在E.coli BL21 (DE3)和E.coli Rosetta中进行了诱导表达和条件优化.重组融合蛋白在E coli Rosetta中的最佳表达条件为1.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)、35℃诱导表达2h,产率为13.22 mg/L;在E.coli BL21 (DE3)中的最佳表达条件是为0.5 mmol/L IPTG、30℃诱导表达2h,产率为9.55 mg/L.重组融合蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、质谱鉴定表明,其含有所预测的草莓轻型黄边病毒外壳蛋白抗原表位肽段AE.AE重组融合蛋白经Ni2+亲和色谱纯化、EK酶切、分子筛除去融合蛋白标签后,免疫产蛋鸡.从免疫鸡所产鸡蛋中提取鸡卵黄免疫球蛋白(immunoglobulinofyolk,IgY),Dot-Blot检测抗体结合活性.结果表明,所提取的IgY可特异性识别AE肽段和SMYEV外壳蛋白.这一结果表明所预测的AE肽段具有较好的免疫原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王永刚	兰州理工大学生命科学与工程学院	98	348	10.0	14.0
2	马建忠	兰州理工大学生命科学与工程学院	40	94	6.0	8.0
3	杨菊梅	兰州理工大学生命科学与工程学院	3	1	1.0	1.0
4	魏艳	兰州理工大学生命科学与工程学院	2	1	1.0	1.0
5	潘博		3	1	1.0	1.0
6	李印武		3	1	1.0	1.0
7	邓子兵	兰州理工大学生命科学与工程学院	2	1	1.0	1.0