外周血造血干细胞来源微泡的生物学特性

• 作者: 乔建辉 余长林 刘铁强 孙琪云 左洪莉 梁晨 王一 王俊辉 王路 胡锴勋 艾辉胜 蔡博 邓磊 郭梅 黄雅静
• 来源期刊: 中国实验血液学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 外周血造血干细胞 微泡 免疫调节 造血
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 造血干细胞生物学
• 页码范围: 637-643
• 页数: 7页
• 分类号: R331.2|R331.1
• 字数: 5225字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7534/j.issn.1009-2137.2017.03.001

摘要

目的:探讨正常人外周血造血干细胞(PB-HSC)分泌的微泡(microvesicle,MV)的免疫调节功能及对造血集落形成的影响.方法:采用密度梯度离心法分离PB-HSC并培养,收集第48 h上清液,使用超速离心法分离提取MV.通过电子显微镜观察MV形态;采用BCA法定量检测MV蛋白分泌量;采用流式细胞术检测其表面标志物.将MV与正常人外周血单个核细胞(PB-MNC)共培养,共培养12h后通过共聚焦扫描电子显微镜观察MV与PB-MNC的作用方式;共培养48 h后采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)法检测上清中IL-2,IL-6,IL-8,IL-10,IFN-γ及TNF-α的分泌量;采用流式细胞仪检测T细胞亚群、T细胞激活变化及不同亚群细胞胞内细胞因子染色情况.用甲基纤维素半固体培养基检测MV及MV与PB-MNC共培养48 h后上清液对外周血造血干细胞集落形成的影响.结果:电子显微镜观察分离得到的MV为卵圆形膜性小囊泡,BCA法检测MV蛋白分泌量为29-110μg.流式细胞术测得MV带有混合标志,其中高表达特异性标志CD63 (85.86％)与干细胞标志CD34(33.52％).共培养12h后共聚焦扫描电子显微镜显示,MV与PB-MNC二者相融合.共培养48 h后,ELISA法检测结果表明,MV可促进PB-MNC分泌IL-6,IL-8,IL-10与TNF-α,而IL-2和IFN-γ水平均无变化明显.流式细胞术结果显示,T细胞亚群及T细胞的激活无明显改变.胞内因子染色结果表明,CD11c+细胞内IL-8因子显著增多.集落培养实验表明,MV及MV与PB-MNC共培养48 h后上清液可促进造血集落形成.结论:PB-HSC来源的MV具有免疫调节及促进造血集落形成的作用.