家蚕GAPDH内参蛋白多克隆抗体的制备及其检测

• 作者: 乔惠丽 杨娟娟 王远卓 郭兴国 陈莹
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 家蚕 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 138-144
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0104

摘要

制备家蚕GAPDH内参蛋白多克隆抗体,并对该抗体进行检测.利用PCR技术从家蚕中克隆GAPDH基因,构建其原核表达载体,转化大肠杆菌,诱导表达重组蛋白并纯化.纯化后的蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备GAPDH多克隆抗体.用酶联免疫吸附法和Western blot检测抗体的效价和特异性.结果显示,成功构建GAPDH/pET-28a原核表达载体,获得高纯度的GAPDH重组融合蛋白;经SDS-PAGE和抗His单抗检测,纯化后蛋白的分子量大小与预测的一致;以该蛋白为免疫抗原,采用4次免疫方式对新西兰大白兔进行免疫,获得GAPDH多克隆抗体血清.酶联免疫吸附检测结果表明,GAPDH抗体的效价为1:8000,并能与天然家蚕蛋白特异性结合.成功制备了家蚕内参蛋白GAPDH多克隆抗体,为深入研究家蚕中不同蛋白的生理功能和作用奠定了坚实的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨娟娟	南阳师范学院农业工程学院河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室	2	5	2.0	2.0
2	乔惠丽	南阳师范学院农业工程学院河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室	10	36	4.0	6.0
3	郭兴国	南阳师范学院农业工程学院河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室	3	3	1.0	1.0
4	陈莹	南阳师范学院农业工程学院河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室	1	3	1.0	1.0
5	王远卓	南阳师范学院农业工程学院河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室	1	3	1.0	1.0