羊口疮病毒蛋白ORFV035的表达、纯化和多克隆抗体的制备

• 作者: 王丽洁 王小平 罗树红 郝文波 陈倩倩 陈慧芹
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 羊口疮病毒 ORFV035 纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 150-154
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016-1182

摘要

克隆表达羊口疮病毒蛋白ORFV035,并制备其多克隆抗体,为后续对病毒复制、装配、形态发生和成熟过程的研究奠定基础.PCR扩增羊口疮病毒ORFV035基因,将其与质粒pET-30a(+)经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后连接,构建重组质粒pET30a-035.重组质粒经双酶切和测序鉴定,转化感受态大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况.表达产物进行超声破碎和Ni柱纯化,纯化后目的蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体并对其进行鉴定.成功构建了重组质粒pET30a-035,在大肠杆菌BL21中以包涵体形式高效表达.包涵体洗涤、溶解后进行Ni柱纯化,得到纯度较高的ORFV035-his融合蛋白.以纯化蛋白免疫小鼠获得多克隆抗体.Western blot检测显示该多抗可以识别天然ORFV035蛋白.成功诱导表达、纯化ORFV035蛋白并制备ORFV035多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郝文波	南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所	44	69	4.0	5.0
2	罗树红	南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所	16	33	3.0	5.0
3	王小平	南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所	18	57	5.0	5.0
4	陈慧芹	南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所	3	6	1.0	2.0
5	王丽洁	南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所	1	4	1.0	1.0
6	陈倩倩	南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所	1	4	1.0	1.0