鲍曼不动杆菌外膜蛋白34的表达纯化及其生物活性分析

• 作者: 安志远 苏建荣
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 鲍曼不动杆菌 外膜蛋白34 包涵体 圆二色谱 凋亡
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 185-194
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0102

摘要

通过基因克隆方法制备鲍曼不动杆菌ATCC 19606(Acinetobacter baumannii ATCC 19606)外膜蛋白34(Outer membrance protein 34,Omp34),并分析其生物结构及对HEK293细胞的凋亡作用.采用PCR方法扩增鲍曼不动杆菌ATCC19606 Omp34基因,并将其克隆到表达载体pET28a(+)以构建重组质粒pET28a(+)-Omp34,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导蛋白表达并用镍柱亲和层析纯化蛋白,使用L-精氨酸和还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)可使Omp34蛋白正确复性,生物信息预测Omp34生物结构,利用圆二色谱(Circular dichroism CD)技术测定Omp34的二级结构,通过流式细胞术和Western blot检测Omp34对HEK293细胞的凋亡作用.成功构建表达载体pET28a(+)-Omp34,并在原核表达体系中高效表达,通过复性得到可溶蛋白.生物信息预测Omp34为 β 桶状蛋白,圆二色谱证实Omp34结构为 β 折叠结构,其中 α-螺旋含量为12%、β-折叠为39%、β-转角为22%、无规则卷曲为27%.复性的Omp34可使HEK293细胞发生凋亡.通过分子克隆技术成功获得了鲍曼不动杆菌外膜蛋白34,并解析出其二级结构,证实其可以导致HEK293细胞凋亡,这为将来进一步研究鲍曼不动杆菌外膜蛋白34的生物学功能及其耐药机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苏建荣	首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心	167	935	15.0	19.0
2	安志远	首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心	6	11	2.0	3.0