诱导型多能干细胞在体外三维环境中诱导分化出肠道类器官

• 作者: 嵇武 惠璜 李向阳 相小松 赵鑫 郑鹏
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 分化 诱导型多能干细胞 定向分化 体外培养 确定性内胚层 肠道类器官
• 年，卷（期）: 2017,（25）
• 所属期刊栏目: 干细胞培养与分化
• 页码范围: 4057-4061
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 4827字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.25.020

摘要

背景:诱导型多能干细胞是一类特殊的细胞,具有自我更新及多向分化潜力,在一定诱导条件下能够分化为肠道类器官.目的:探究诱导型多能干细胞在体外特定条件下是否可分化出肠道类器官.方法:复苏B6J小鼠18代诱导型多能干细胞,培养3 d克隆单位覆盖培养皿80％左右后,加入含有激活素A的培养基培养3 d,得到确定性内胚层,加入含成纤维细胞生长因子4和Wnt3A的培养基培养4 d,得到中后肠细胞球,将其与Matrigel培养基混合后滴入四孔板形成滴株样生长,在HEPES、Rspondin1、头蛋白、表皮细胞生长因子、B27添加剂等生长因子等共同作用下向肠道类器官分化,期间观察细胞形态变化,检测确定性内胚层FoxA2、Sox17表达,中后肠细胞球特异性标记物CDX2表达,肠道类器官特异性标记物Sox9、CGA、MMP7表达.结果与结论:①诱导型多能干细胞在含有激活素A的培养基培养3 d,细胞初步分化,相互融合,确定性内胚层标记物FoxA2、Sox17表达较诱导型多能干细胞明显升高(P<0.05);②确定性内胚层在含成纤维细胞生长因子4和WNT3A环境下培养第3天开始就有少量中后肠细胞球形成,第4天大量中后肠细胞球形成,中后肠细胞球标记物CDX2较确定性内胚层明显升高(P<0.05);③中后肠细胞球培养3 d后逐渐形成肠道类器官,其特异性标记物Sox9、CGA、MMP7表达明显高于中后肠细胞球(P<0.05);④结果表明,诱导型多能干细胞可在体外三维环境中诱导分化出类肠道器官.