抗中间普氏菌卵黄抗体的制备及其对实验性妊娠期龈炎的预防作用

• 作者: 叶兴如 周乐春 周永敏 孟明理 庞罡 徐燕 沈继龙 王晓静 王荣海 程婷
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 中间普氏菌 卵黄抗体 妊娠期龈炎
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1154-1159
• 页数: 6页
• 分类号: R781.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2017.08.012

摘要

目的 制备并纯化抗中间普氏菌卵黄抗体(抗P.intermedia-IgY),观察其对大鼠实验性妊娠期龈炎的预防作用.方法 厌氧培养P.intermedia菌,2%甲醛灭活,以终浓度为1×109 CFU/ml的P.intermedia菌,1 ml(0.5 ml菌液+0.5 ml佐剂)/次,免疫蛋鸡4次.用卵黄分离器去除蛋清,无菌注射器刺破卵黄膜,收集卵黄液,两步硫铵沉淀法纯化抗P.intermedia-IgY.SDS-PAGE凝胶电泳、Western blot、ELISA对其分子量及特异性鉴定,并检测免疫后效价变化.将30只雌性SD大鼠,15只雄性SD大鼠,雌 ∶雄=2 ∶1,合笼获得24只孕鼠,随机分为4组:0.12%氯己定孵育组,抗P.intermedia-IgY孵育组,生理盐水孵育组,空白对照组,观察抗P.intermedia-IgY对实验性妊娠期龈炎的抑制作用.结果 经4次免疫后抗体最高效价为1 ∶512 000,维持45 d.1 g卵黄经两步硫铵沉淀后得IgY约18 mg.SDS-PAGE凝胶电泳显示纯化后IgY纯度达64.5%.Western blot显示抗P.intermedia-IgY识别并特异性结合P.intermedia菌裂解片段.动物实验观察见0.12%氯己定孵育组及抗P.intermedia-IgY孵育组牙龈指数显著低于生理盐水孵育组(P<0.01),而两者之间牙龈指数差异无统计学意义.牙龈组织病理学观察显示抗P.intermedia-IgY孵育组牙龈的炎症状态轻于生理盐水孵育组.结论 经4次免疫后可得到持续高效价的抗P.intermedia-IgY,且抗P.intermedia-IgY能够减轻大鼠实验性妊娠期龈炎的炎症状态,对大鼠实验性妊娠期龈炎有一定的预防作用.