优化密码子及诱导温度提高雪白根霉脂肪酶在毕赤酵母中的表达

• 作者: 刘丹妮 刘金山 唐业 夏雨 李阳源 杨玲 王建荣 陈丽芝 黄佳乐
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 密码子优化 诱导温度优化 雪白根霉 脂肪酶
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 18-23
• 页数: 6页
• 字数: 4140字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201701004

摘要

根据毕赤酵母密码子的偏好性,通过在线软件对雪白根霉脂肪酶基因(rnl)进行密码子优化.优化后的脂肪酶基因(rnl-opt)GC含量由原来的46％提高到49％,碱基A,T,C,G均匀分布,减少了AT和GC富集区,适应指数由0.82提升到0.85.将rnl-opt连接到表达载体pPICZαA并转入毕赤酵母X33中.将含有rnl和rnl-opt的重组工程菌在摇瓶和50 L发酵罐中进行诱导表达.摇瓶培养条件下,含有rnl和rnl-opt重组工程菌的最大酶活分别为458、956 U/mL.50 L发酵罐培养条件下,含有rnl和rnl-opt重组工程菌的最大酶活和总蛋白浓度分别为14 856、30 500 U/mL和3.61、7.8 g/L.为了进一步提高含rnl-opt重组工程菌的表达酶活,对其在50L发酵罐培养的诱导温度进行优化,当诱导温度为22℃时,含rnl-opt重组工程菌的酶活和细胞湿重均达到最大值分别为39 520 U/mL和461 g/L.相对于30 ℃C,酶活和细胞湿重分别提高了30％和16％.