大肠杆菌中顺式-3-羟脯氨酸羟化酶的定向改造

• 作者: 孙付保 张震宇 王晓姣 魏照辉 黄建华
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 重组大肠杆菌 易错PCR 顺式-3-羟脯氨酸(cis-3-hydroxyproline,H3P) 脯氨酸-3-羟化酶 定向改造
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 7-11
• 页数: 5页
• 字数: 4158字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201701002

摘要

对以L-脯氨酸为底物,产顺式-3-羟脯氨酸(cis-3-hydroxyproline,H3P)的羟化酶基因进行定向改造.从重组菌E.coli BL21(DE3)/pET21 a-ptrp2-H3P出发,通过易错PCR随机突变和定点突变处理,利用多孔板和创建的简易显色法相结合的高通量方法筛选出2株H3P高产菌P-2-H3、P-9-D5.经基因测序后得到5个突变位点R58C、T83I、H89Y、F109Y、Y119I,并在出发菌基础上对此5个位点进行单一定点突变,得到5个突变体TBT-R58C、TBT-T83I、TBT-H89Y、TBT-F109Y、TBT-Y1191.发酵24 h测其产量找出3个优势突变位点.以TBT-R58C为出发菌,依次对另外2个位点进行定点突变.得到TBT-R58C-T831-H89Y突变体.发酵24 h产量达到了1125.3 mg/L.与重组菌相比,TBT-R58C-T83I-H89Y的产量提高了53.6％.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张震宇	江南大学工业生物技术教育部重点实验室糖化学与生物技术教育部重点实验室	18	41	3.0	6.0
2	黄建华	江南大学工业生物技术教育部重点实验室糖化学与生物技术教育部重点实验室	2	2	1.0	1.0
3	王晓姣	江南大学工业生物技术教育部重点实验室糖化学与生物技术教育部重点实验室	3	3	1.0	1.0
4	魏照辉	江南大学工业生物技术教育部重点实验室糖化学与生物技术教育部重点实验室	2	2	1.0	1.0