β2肾上腺素受体基因在Sf9细胞中的表达及纯化

• 作者: 兰凤英 刘媛 张俊花 王健 韩正政
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: β2肾上腺素受体 杆状病毒表达载体 Sf9细胞 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2017,（20）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 34-39
• 页数: 6页
• 分类号: TS201.6
• 字数: 4829字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201720006

摘要

通过密码子优化、昆虫杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac)构建、表达条件筛选及镍柱亲和层析,研究β2肾上腺素受体(β2 adrenergic receptor,β2AR)基因(β2AR)在昆虫细胞Sf9中的高效表达及纯化策略.方法:人工合成改造后的β2AR基因,将其克隆至转移载体pFastBac1中,构建重组杆状病毒表达质粒pFastBac l-β2AR',转染昆虫细胞Sf9,优化表达条件,采用镍离子亲和层析法纯化重组蛋白并进行活性鉴定.结果:适宜的表达条件为感染细胞使用的感染复数5、感染后表达时间48 h,Western blot分析显示在47 kD左右处出现清晰的特异性条带,与预期结果一致.纯化的受体蛋白纯度大于90％,活性鉴定结果显示该受体蛋白可特异性吸附盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺3种β激动剂的酶标记物,OD值分别为0.983、0.947和0.912.结论:本研究实现了β2AR受体在Sf9细胞中的表达,且纯化后的受体蛋白保持了较好的β激动剂亲和活性,为利用β2AR受体开展β激动剂多残留快速检测技术提供了依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王健	河北北方学院农林科技学院	41	149	7.0	10.0
3	刘媛	河北北方学院农林科技学院	32	111	7.0	9.0
4	兰凤英	河北北方学院农林科技学院	22	100	6.0	9.0
7	张俊花	河北北方学院农林科技学院	17	86	5.0	8.0
8	韩正政	河北北方学院农林科技学院	2	1	1.0	1.0