滇重楼鲨烯环氧酶基因的克隆及原核表达研究

• 作者: 叶鑫 董栩 许燕 赵爽
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 滇重楼 鲨烯环氧酶 基因克隆 原核表达 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 1839-1844
• 页数: 6页
• 分类号: R282.12
• 字数: 4864字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2017.09.022

摘要

目的 克隆滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis三萜皂苷生物合成途径中的关键酶鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)基因,并进行原核表达.并用Real-time PCR法检测eDNA样本中SE1基因和SE2基因的相对量.方法 以滇重楼根为材料提取总RNA并反转录为eDNA.以cDNA为模板,根据转录组数据中的2组SE基因全长序列设计特异性引物,对SE基因进行克隆后转入到pEASY-T1 Simple Cloning Vector中,经测序鉴定正确后,构建pEASY-E1-SE表达载体,利用ArtMedia protein Expression/Amp+培养基自动诱导表达.Real-time PCR法检测eDNA样本中SE1和SE2基因的相对量.结果 获得了2条滇重楼SE基因,命名为ppSE1和ppSE2.ppSEl的全长为1 932 bp,开放阅读框(ORF)为1 578 bp,编码525个AA;ppSE2的全长为1 828 bp,ORF长为1 548 bp,编码515个氨基酸.荧光定量PCR结果显示ppSE1基因和ppSE2基因在茎和叶中的表达具有显著差异,ppSE1的表达在叶中最为显著.酶切和测序结果表明,原核表达载体pEASY-E1-SE构建成功;SDS-PAGE分析显示,在BL21 (DE3)表达感受态细胞中成功诱导表达了SE基因的2种融合蛋白.结论 克隆了滇重楼的SE基因,获得了在体外具有生物学活性的SE蛋白.ppSE1基因和ppSE2基因在滇重楼中具有不同的表达模式,在滇重楼次生代谢产物的合成中起着不同的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵爽	云南中医学院药学院	17	68	6.0	7.0
2	董栩	云南中医学院药学院	4	17	3.0	4.0
3	许燕	云南中医学院药学院	4	19	3.0	4.0
4	叶鑫	云南中医学院药学院	1	3	1.0	1.0