单链抗体scFv-GCN4在大肠杆菌中的重组表达及活性检测

• 作者: 于文功 庄婷婷 顾玉超 高红 齐洁琼
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 单链抗体 scFv-GCN4 重组表达 大肠杆菌 活性检测
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 606-609
• 页数: 4页
• 分类号: R-33|Q78|Q93|R392
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2017.04.002

摘要

目的:重组表达融合GST或MBP标签的单链抗体scFv-GCN4,对其进行分离纯化,并检测其生物学活性.方法:构建pBAD-MBP-scFv-GCN4及pBAD-GST-scFv-GCN4表达载体,使用大肠杆菌(Escherichia coli) Topl0菌株表达并亲和纯化重组蛋白MBP-scFv-GCN4及GST-scFv-GCN4.构建pET30a-Nus-GCN4载体,使用E.coli BL21 (DE3)菌株表达重组蛋白Nus-GCN4及Nus.以重组的GCN4为特异性抗原,通过Pull-down技术和Western Blot技术,检测MBP-scFv-GCN4及GST-scFv-GCN4的抗体活性及特异性.结果:重组菌株E.coli Top 10可高效表达可溶性的MBP-scFv-GCN4和GST-scFv-GCN4蛋白,通过亲和纯化,均得到了高纯度的重组蛋白.重组菌株E.coli BL21(DE3)可高效表达可溶性的Nus与Nus-GCN4蛋白.Pull-down及Western Blot结果显示,重组蛋白MBP-scFv-GCN4及GST-scFv-GCN4均可以高效、特异地识别重组的GCN4抗原.结论:重组抗体GST-scFv-GCN4及MBP-scFv-GCN4均可在E.coli中高效表达,并且具有良好的抗体活性及特异性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于文功	中国海洋大学医药学院	64	501	12.0	20.0
2	齐洁琼	中国海洋大学医药学院	1	1	1.0	1.0
3	高红	中国海洋大学医药学院	1	1	1.0	1.0
4	庄婷婷	中国海洋大学医药学院	3	1	1.0	1.0
5	顾玉超	中国海洋大学医药学院	16	25	3.0	4.0