利用退火反应产生粘性末端的基因克隆新方法

• 作者: 曾静静 王启军 褚茂平 赵婷婷
• 来源期刊: 浙江医学
• 关键词: 分子克隆 聚合酶链反应 退火 限制性酶切位点 粘性末端
• 年，卷（期）: 2017,（14）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1166-1169,后插2
• 页数: 5页
• 字数: 3360字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.14.2017-1035

摘要

目的 通过引物设计和退火反应产生内切酶的粘性末端,旨在开发一种高效、简单、可靠的分子克隆方法.方法 选定限制性内切酶(平末端或者粘性末端)设计3条或4条引物,同时进行两次独立的聚合酶链式反应(PCR),随后把两次PCR产物回收后混在一起经过解链退火,再将其与双酶切的载体质粒进行连接反应,最后转化即可得到目的克隆. 结果 利用此方法成功一次性将若干靶基因(P90rsk、Nprl2、Mios、Ragc、S6k、Pkca)构建在经EcoRV和Notl双酶切后的pcDNA3.1(+)载体上,经酶切及测序验证. 结论 该方法无需考虑靶基因内部是否存在酶切位点,可省去PCR产物酶切及之后的纯化回收过程,可快速并准确地克隆目标基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	褚茂平	温州医科大学附属第二医院/育婴儿童医院儿科	10	20	3.0	4.0
2	曾静静	温州医科大学附属第二医院/育婴儿童医院儿科	3	6	1.0	2.0
3	赵婷婷	温州医科大学附属第二医院/育婴儿童医院儿科	1	1	1.0	1.0
4	王启军	上海交通大学医学院	1	1	1.0	1.0