稳定表达 Notch1胞内结构域肺腺癌细胞株的构建及鉴定

• 作者: 刘季春 吴霞 周学亮 詹宇亮 赖松青 邹斌
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 肺腺癌 Notch蛋白 胞内结构域 慢病毒重组质粒
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 5-8
• 页数: 4页
• 分类号: R734.2
• 字数: 3208字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2017.06.002

摘要

目的：构建Notch1胞内结构域（ N1ICD）稳定表达的肺腺癌A549细胞株。方法采用PCR方法扩增N1ICD基因，构建慢病毒重组质粒pHBLV-N1ICD-ZsGreen-Puro（LV-N1ICD），采用PCR和基因测序鉴定重组质粒。高纯度无内毒素抽提慢病毒重组质粒和辅助包装原件载体质粒，使用慢病毒空载质粒（ LV-ZsGreen-Puro）和LV-N1ICD共转染293T细胞包装慢病毒，利用药物筛选法测定病毒滴度。将A549细胞分成A549-N1ICD组和A549-ZsGreen-Puro组，分别加入LV-N1ICD和LV-ZsGreen-Puro，取制备好的慢病毒感染A549细胞，加入嘌呤霉素筛选稳定转染细胞株，荧光显微镜观察转染效率，以带有绿色荧光的细胞初步视为稳定转染的细胞株。以A549细胞为对照组，进一步采用qPCR和Western blot方法分别检测N1ICD mRNA及蛋白表达。结果 PCR及基因测序结果表明pHBLV-N1ICD-ZsGreen-Puro重组质粒构建成功。 LV-N1ICD组病毒滴度为1×108 TU／mL，LV-ZsGreen-Puro组病毒滴度为1×108 TU／mL。经嘌呤霉素筛选后，荧光显微镜下观察细胞形态无明显变化，A549-ZsGreen-Puro组和A549-N1ICD组70％～80％的细胞带有绿色荧光。对照组、A549-ZsGreen-Puro组、A549-N1ICD组的N1ICD mRNA相对表达量分别为1．59±0．11、1．09±0．10、70．81±6．39，A549-N1ICD组高于其他两组（P均＜0．01）。三组N1ICD蛋白相对表达量分别为1．99±0．13、1．73±0．08、6．58±0．43，A549-N1ICD组高于其他两组（P均＜0．01）。结论成功构建了稳定表达N1 ICD的肺腺癌A549细胞株。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周学亮		24	62	4.0	7.0
2	刘季春		73	226	8.0	11.0
3	吴霞		5	7	2.0	2.0
4	赖松青		7	3	1.0	1.0
5	邹斌		8	20	2.0	4.0
6	詹宇亮		2	0	0.0	0.0