小鼠大脑抑制性神经元特异性多聚核糖体结合型mRNA的提取

• 作者: 贾怡昌 陈访访
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠 大脑 抑制性神经元特异性 多聚核糖体结合型 mRNA
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2001-2006
• 页数: 6页
• 分类号: R-33|Q593.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2017.11.001

摘要

目的:建立能够高效、快速地从小鼠大脑提取抑制性神经元特异性多聚核糖体结合的mRNA的方法,为进行小鼠大脑抑制性神经元特异性翻译表达谱分析提供材料.方法:依据Cm-loxp系统,将RiboHA标签小鼠与抑制性神经元特异性VGAT-Cre/PV-Cre小鼠杂交,启动抑制性神经元中核糖体上HA标签的表达.后代小鼠进行基因型鉴定,获得同时表达Cre和HA的小鼠.利用免疫荧光染色检测HA的表达.通过免疫共沉淀从目标细胞群体中获得HA标记的多聚核糖体.提取多聚核糖体结合的mRNA.荧光定量PCR法检测所得mRNA的细胞类型特异性.利用琼脂糖凝胶电泳及bioanalyzer 2100检测所得mRNA及cDNA的质量.结果:HA标记的多聚核糖体在目标细胞群体中能够被高效启动表达.抑制性神经元特异性多聚核糖体结合的mRNA能够被特异性地富集提取.所获细胞类型特异性的多聚核糖体结合的mRNA及cDNA的质量足以用来进行高通量测序及翻译表达谱的分析.结论:利用Cre-loxp遗传系统标记,结合蛋白免疫共沉淀实验,建立了从小鼠大脑抑制性神经元中高效特异地获得多聚核糖体结合的mRNA的方法,为进一步进行小鼠大脑抑制性神经元特异性翻译表达谱的分析奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贾怡昌	清华大学医学院	2	0	0.0	0.0
2	陈访访	清华大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0