真核表达载体pEGFP-N1-ASIC2a的构建及功能验证

• 作者: 刘晓燕 张康 李栋 袁维秀 马晓芸
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: ASIC2a 载体构建 真核表达载体 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究·论著
• 页码范围: 8-13
• 页数: 6页
• 分类号: Q782
• 字数: 4760字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2017.11.002

摘要

目的 构建含大鼠ASIC2a全长互补脱氧核糖核酸(cDNA)的绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFP-N1-ASIC2a并转染至HEK293细胞,观察其表达和分布情况.方法 设计、合成ASIC2a基因引物,利用聚合酶链反应(PCR)技术,以现有质粒pcDNA3.1-ASIC2a为模板扩增出含有限制性内切酶(XhoⅠ与EcoRⅠ)酶切位点的ASIC2a基因片段与载体pEGFP-N1酶切后连接形成重组质粒pEGFP-N1-ASIC2a,并瞬时转染至HEK293细胞中,利用细胞膜片钳方法观察其表达电流的情况.为进一步明确其亚细胞定位,将质粒EGFP-N1-ASIC2a、pDsRed-Monomer-Mem和pDsRed2-ER共同转染至HEK293细胞中.结果 PCR扩增得到正确的ASIC2a基因片段,酶切鉴定和测序证实获得重组质粒pEGFP-N1-ASIC2a,并将其瞬转至HEK293细胞后,成功记录到ASIC2a同聚体电流.然后利用共转染的方法观察到,pEGFP-N1-ASIC2a主要在HEK293细胞内质网表达,细胞膜表达较少.结论 重组绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-N1-ASIC2a构建成功,且在HEK293细胞中主要表达于内质网,为下一步研究ASIC2a的功能,特别是为ASIC2a在缺血性神经元损伤中的作用及其机制的研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘晓燕	军事医学科学院毒物药物研究所	14	17	3.0	3.0
2	马晓芸	军事医学科学院毒物药物研究所	16	15	2.0	3.0
3	李栋	中国人民解放军总医院麻醉手术中心	16	22	3.0	4.0
4	袁维秀	中国人民解放军总医院麻醉手术中心	9	67	5.0	8.0
5	张康	军事医学科学院毒物药物研究所	4	42	2.0	4.0