草甘膦人工抗原的制备及兔源多抗的ELISA鉴定

• 作者: 余秋颖 侯玉泽 王方雨 王晶 王耀 胡骁飞 邓瑞广 邢云瑞 郝俊芳
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 农学
• 关键词: 草甘膦 人工抗原 多抗 酶联免疫吸附检测
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 65-69
• 页数: 5页
• 分类号: S482.4
• 字数: 3583字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201704011

摘要

采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimidehydrochloride,EDC)法和戊二醛(glutaraldehyde,GA)法,合成了草甘膦(N-(phosphonomethyl) glycine,PMG)人工抗原,通过免疫制备高敏感性、特异性的兔PMG多克隆抗血清并进行鉴定.将PMG分别与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和鸡卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)偶联,合成免疫抗原PMG-BSA和包被抗原PMG-OVA.经紫外扫描、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定后,免疫新西兰大白兔,制备多抗.利用间接酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法测定多抗效价,间接竞争ELISA方法测定血清的敏感性和特异性.结果表明,免疫的3只兔血清效价均达1∶104以上,2号兔多抗效果最好,半数抑制浓度(IC50)为30.9 μg/mL,且具备良好的特异性.本实验成功合成了PMG人工抗原,并制得了敏感性高、特异性好的兔多抗,为PMG的免疫学快速检测方法的提供参考.