基于尿嘧啶磷酸核糖转移酶为负向筛选标记的生酮古龙酸杆菌基因组无痕修饰系统的构建

• 作者: 冯惠勇 刘金雷 李天明 杜红燕 王北辰 陆浩
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 生酮古龙酸杆菌 负向筛选标记 无痕改造 5-氟尿嘧啶
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 39-44
• 页数: 6页
• 分类号: Q789
• 字数: 4406字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201704007

摘要

通过构建尿嘧啶磷酸核糖转移酶基因(upp)敲除打靶质粒,采用同源重组的方法获得了生酮古龙酸杆菌(Ketogulonigenium vulgare)的upp基因缺失突变株K.vulgare Aupp,可作为基因组无痕修饰系统底盘细胞的upp基因表达载体,转化突变株K.vulgare Aupp,获得upp基因回补菌株PBB-upp,并验证了upp作为负向筛选标记的可行性.实验结果表明:突变株Aupp在1 mg/mL的5-氟尿嘧啶培养基上可生长,野生型和回补菌株PBB-upp不能生长,3株菌对5-氟尿嘧啶的抗性存在显著差异,说明可以将upp基因作为负向筛选标记,与正向筛选标记相结合,在upp基因缺失的底盘细胞基础上通过两次同源重组,实现基因组的无痕修饰与改造.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯惠勇	河北科技大学生物科学与工程学院	26	260	10.0	15.0
2	刘金雷	河北科技大学生物科学与工程学院	12	20	2.0	3.0
3	陆浩	河北科技大学生物科学与工程学院	5	4	1.0	1.0
4	李天明	河北科技大学生物科学与工程学院	16	25	3.0	4.0
5	杜红燕	河北科技大学生物科学与工程学院	5	6	2.0	2.0
6	王北辰	威斯康星大学农业与生命学院	2	4	2.0	2.0