大鼠足细胞的原代培养及其Nephrin的特异表达

• 作者: 张春江 杨晓萍 贾林 顾杰
• 来源期刊: 广东医学
• 关键词: 足细胞 细胞培养技术 Nephrin
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 825-829
• 页数: 5页
• 字数: 5592字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立简便的大鼠足细胞原代培养体系,检测其去氧肾上腺素(Nephrin) mRNA及蛋白的表达水平.方法 无菌取肾,分离肾皮质,胶原酶消化法分离肾小球,培养9～10d,胰蛋白酶差异消化法传代,过筛去除肾小球继续培养5～7 d:形态学观察和间接免疫荧光法进行足细胞鉴定;流式细胞仪分析足细胞纯度;实时定量PCR(qRT-PCR)、间接免疫荧光法和Western blot法比较前三代足细胞中Nephrin mRNA及蛋白的表达水平.结果 接种5d后大部分肾小球贴壁,肾小球周围有细胞爬出,其最外缘有树枝状细胞分布,形态学及特异性抗体Nephrin、WT-1鉴定为足细胞;流式细胞仪分析足细胞纯度为94.7％;间接免疫荧光和qRT-PCR均显示:与第二、三代足细胞相比,第一代足细胞中Nephrin mRNA和蛋白表达均较高(均P＜0.05);Western blot示体外培养大鼠足细胞表达两种分子量的Nephrin,且第一代足细胞Nephrin灰度值高于第二、三代足细胞(P＜0.05).结论 酶消化法结合差异过筛法接种可促进肾小球贴壁,有利于培养纯度高的足细胞;大鼠足细胞体外培养条件下能特异性表达Nephrin结构及功能蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨晓萍	石河子大学医学院	55	127	7.0	8.0
2	张春江	石河子大学医学院	17	43	4.0	5.0
3	贾林	石河子大学医学院	7	6	2.0	2.0
4	顾杰	石河子大学医学院	4	0	0.0	0.0