基于荧光标记的大黄鱼氧化肌肉蛋白质双向电泳技术的建立

• 作者: 仪淑敏 励建荣 周明言 徐永霞 朱文慧 李学鹏 林洪 渠宏雁 王金厢
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 双向电泳 大黄鱼 氧化肌肉蛋白质 荧光素-5-氨基硫脲 荧光标记
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 27-35
• 页数: 9页
• 分类号: TS254.1
• 字数: 5888字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201706005

摘要

在确定大黄鱼肌肉蛋白质双向电泳分离的基础上,采用荧光素-5-氨基硫脲(fluorescein-5-thiosemicarbazide,FTSC)对氧化的大黄鱼肌肉蛋白质进行荧光标记和参数优化,进而建立氧化肌肉蛋白质的双向电泳技术体系.结果显示,氧化肌肉蛋白质较佳的双向电泳程序为:蛋白样品采用液氮研磨和裂解液Ⅲ(含8 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4％3-(3-(胆酰胺丙基)二甲氨基)丙磺酸内盐(CHAPS)、65 mmol/L二硫苏糖醇(DTT)和0.2％载体两性电解质)制备;采用FTSC溶液40℃恒温水浴3h,对氧化蛋白质进行荧光标记,并采用乙醇-乙酸乙酯混合溶液进行洗脱;标记后的蛋白样品采用pH 5～8的固定化pH梯度(IPG)预制胶条上样后,采用等电聚焦程序C(50V主动水化14h,500V、2h,1 000V、1.5 h及4000V、1 h三段式除盐,6000V、0.5h和10 000V、1h两段式升压,10 000V聚焦80 000 vhr,最后500V保持10h)进行第1向分离,再采用12％的聚丙烯酰胺分离胶进行第2向分离;最后所得凝胶经直接荧光扫描和银染后扫描分别得到氧化肌肉蛋白质的荧光图谱和肌肉全蛋白电泳图谱.由该程序获得的双向电泳图谱具有分离度好、蛋白点清晰、分布均匀等优点,为利用双向电泳和蛋白质组学技术分离鉴定氧化蛋白质种类、进而阐明蛋白质氧化机制提供理论依据.