使用透明质酸钠复合海藻酸钠水凝胶球3D培养软骨细胞抑制细胞去分化的研究

• 作者: 刘鑫成 孟星星 张煜珅 成西侠 祝瑞 范宏斌
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 软骨细胞 透明质酸钠 海藻酸钠 水凝胶 3D培养
• 年，卷（期）: 2017,（16）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3049-3053,3098
• 页数: 6页
• 分类号: Q813.1+1|R-331|R684.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2017.16.012

摘要

目的:验证海藻酸钠(Alginate,Alg)水凝胶球添加透明质酸钠(Sodium hyaluronate,HA)后,对大鼠膝软骨细胞体外3D培养时软骨细胞去分化的抑制情况.方法:用Ⅱ型胶原酶消化法获取2周龄SD大鼠膝关节原代软骨细胞,体外培养传代至P2.细胞分为2组,l组用2％海藻酸钠水凝胶球3D培养(Alg组),另一组用2％海藻酸钠+1％透明质酸钠的水凝胶球3D培养(Alg/HA组),采用正交法制作海藻酸钠水凝胶球.培养14天后,两组各取水凝胶球进行死活细胞染色观察细胞状态.其他水凝胶球收集后用4％多聚甲醛固定,30％蔗糖溶液脱水,OCT (Optimal cutting temperature compound)包埋剂包埋切片,采用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining,HE染色)、甲苯胺蓝染色观察软骨细胞形态;采用阿利新蓝染色观察对比糖胺聚糖(Glycosaminoglycan,GAG)含量;采用免疫荧光染色对比Ⅱ型胶原(Collagen type Ⅱ,Col Ⅱ)含量;采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测软骨细胞Col Ⅱ和聚蛋白多糖(Aggrecan,ACAN)的表达情况.结果:死活细胞染色显示两组水凝球内软骨细胞状态良好,几乎无死细胞;阿利新蓝染色显示Alg/HA组与Alg组相比软骨细胞分泌更多的GAG;免疫荧光染色显示Alg/HA组比Alg组软骨细胞内含更多的Ⅱ型胶原;Western blot显示Alg/HA组软骨细胞比Alg组Col Ⅱ的蛋白表达更多.结论:含透明质酸钠的海藻酸钠水凝胶可以更好地维持软骨细胞的表型,抑制软骨细胞去分化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范宏斌	第四军医大学西京医院骨科	49	374	12.0	16.0
2	刘鑫成	第四军医大学西京医院骨科	6	12	2.0	3.0
3	张煜珅	第四军医大学西京医院骨科	3	5	1.0	2.0
4	成西侠	第四军医大学西京医院骨科	3	11	2.0	3.0
5	孟星星	2第四军医大学航空航天卫生学教研室	1	3	1.0	1.0
6	祝瑞	3空军工程大学理学院	1	3	1.0	1.0