结核分枝杆菌Rv3586结构域基因真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 单炳乙 吴骏杰 姚庆港 宋世杰 柏银兰 王莹 王辛 路延之
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 Rv3586 结构域 真核表达
• 年，卷（期）: 2017,（18）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3429-3433
• 页数: 5页
• 分类号: R378.911|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2017.18.006

摘要

目的:构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)环二腺苷酸(cyclic diadenosine monophosphate,c-di-AMP)合成酶Rv3586结构域基因的真核表达载体,并在COS-7细胞中表达.方法:以Mtb基因组为模板PCR扩增Rv3586三个结构域基因,分别克隆入pEGFP-N3真核表达质粒,用菌落PCR、质粒酶切和测序方法对插入序列进行鉴定.通过脂质体将重组质粒转染COS-7细胞,间接免疫荧光法检测目的基因在COS-7细胞内的表达.结果:PCR成功扩增出Rv3586三个结构域基因,菌落PCR、质粒酶切和质粒测序鉴定结果表明成功插入目的片段,包含Rv3586的三个结构域基因的真核表达载体构建成功.间接免疫荧光法结果显示,Rv3586三个结构域蛋白在COS-7细胞中表达成功.结论:成功构建Rv3586三个结构域基因的真核表达载体,并在COS-7细胞中表达成功,为后续Mtb Rv3586结构域的功能和应用研究奠定了基础.