泽泻ISSR反应体系的建立与优化

• 作者: 何天友 徐雯 瞿印权 荣俊冬 郑郁善 陈凌艳
• 来源期刊: 安徽农学通报
• 学科: 医学
• 关键词: 泽泻 ISSR 反应体系 优化
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 基础性研究与方法
• 页码范围: 23-26,100
• 页数: 5页
• 分类号: R282.7
• 字数: 3771字
• 语种: 中文

摘要

目的:建立并优化泽泻反应体系和扩增程序,筛选出多态性、重复性较好的ISSR引物,为泽泻种源鉴别以及指纹图谱的构建提供理论基础.方法:利用单因素试验法,对Mg2+浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度及模板DNA含量这5个PCR反应体系主要成分以及退火温度进行筛选,并利用建立优化的反应体系和扩增程序对以往泽泻文献报道的ISSR引物进行筛选.结果:建立了最佳PCR反应体系:20μL的反应液中含2.0mmol·L-1Mg2+,0.4mmol·L-1dNTPs,1.0 U TaqDNA聚合酶,0.4mol·L-1引物,10ng模板DNA,2μL 10xBuffer,13.1μL dd H2O.反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性45s.58.9℃退火45s,72℃延伸90s,40个循环;72℃延伸7min,4℃保存.结论:利用优化的泽泻的反应体系,筛选出15条多态性较好的引物,并对泽泻的21个种源进行ISSR扩增,扩增出的条带清晰、多态性较高,证实了该体系具有较高稳定性、重现性和适用性.此体系也为泽泻种源间的遗传多样性研究以及ISSR分子标记奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑郁善	福建农林大学园林学院	303	2600	26.0	39.0
5	荣俊冬	福建农林大学林学院	178	835	14.0	19.0
6	何天友	福建农林大学园林学院	110	409	10.0	14.0
7	陈凌艳	福建农林大学园林学院	72	320	10.0	14.0
8	徐雯	福建农林大学林学院	13	35	3.0	4.0
9	瞿印权	福建农林大学林学院	13	34	3.0	4.0