应用CRISPR/Cas9慢病毒系统建立Nestin基因敲除的小鼠肾足细胞系

• 作者: 王璐萍 陶颖莉 黄平
• 来源期刊: 浙江临床医学
• 关键词: CRISPR/Cas9 Nestin基因敲除 小鼠肾足细胞
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1194-1196
• 页数: 3页
• 语种: 中文

摘要

目的 基于CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除Nestin基因的条件永生性小鼠肾足细胞株(mouse podocyte,MP).方法 利用Cas9过表达慢病毒构建条件性永生小鼠足细胞Cas9过表达稳转细胞系(CAS9/MP).设计Nestin基因的3个位点(KO1、KO2、KO3),并构建3对靶向Nestin基因的sgRNA寡核苷酸序列,将其连接进GV371质粒中,测序验证后,包装慢病毒颗粒,感染构建好的CAS9/MP,嘌呤霉素筛选(Puromycin)阳性克隆细胞,Cruiser TM酶切检测CAS9-sgRNA对目的基因的剪切活性.结果 成功构建了CAS9/MP及GV371-Nes-sgRNA重组载体,CruiserTM酶法验证表明,CAS9-sgRNA2具有剪切活性.结论 建立能稳定敲除Nestin基因的CRISPR/Cas9慢病毒系统,成功获得Nestin敲除的MP稳转细胞株.为进一步研究Nestin在足细胞中的作用机制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄平	浙江中医药大学第一临床医学院	47	180	8.0	12.0
2	王璐萍	浙江中医药大学第一临床医学院	5	6	2.0	2.0
3	陶颖莉		1	0	0.0	0.0