双齿围沙蚕多肽的制备及其抗肺癌A549细胞活性

• 作者: 丁国芳 余方苗 吴宗泽 杨最素 贾盈露 郑媛媛 陈锐
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 医学
• 关键词: 双齿围沙蚕 多肽 抗肿瘤 A549细胞 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 27-35
• 页数: 9页
• 分类号: R734.2
• 字数: 6745字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201712005

摘要

探讨双齿围沙蚕酶解多肽制备的关键技术及其对肺癌A549细胞的作用.以增殖抑制率为指标,确定最佳酶种并根据单因素试验和正交试验确定其最佳酶解工艺.经超滤获得1～3ku的酶解液,通过阴离子色谱、凝胶过滤色谱和制备色谱对其进行进一步的分离纯化.采用四甲基偶氮唑蓝法测定沙蚕多肽PAP对肺癌A549细胞的增殖抑制率并通过倒置显微镜、吖啶橙/溴化乙锭荧光染色及Hoechst荧光染色观察其细胞形态的变化.实验结果表明最佳酶种是碱性蛋白酶,其最佳酶解条件为:酶解温度50℃、pH 11、料液比1∶1(g/mL)、酶解时间6h、加酶量300U/g.经纯化获得的多肽命名为PAP,其氨基酸序列为Ile-Glu-Pro-Gly-Thr-Val-Gly-Met-Met-Phe,且PAP对A549细胞的作用呈时间与剂量依赖关系,作用后细胞出现了凋亡的形态学特征.因此,PAP能明显抑制肺癌细胞A549增殖,可以诱导其发生凋亡而发挥抗肿瘤作用.