同源重组法构建副干酪乳杆菌组氨酸蛋白激酶基因缺失突变株

• 作者: 岳元春 平文祥 王洋 由田 葛菁萍 高冬妮
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 副干酪乳杆菌 细菌素 组氨酸蛋白激酶基因 同源重组
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 15-20
• 页数: 6页
• 分类号: Q935
• 字数: 4409字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201712003

摘要

构建副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)组氨酸蛋白激酶prcK基因缺失突变株,为prcK基因功能研究提供实验工具.采用同源重组技术构建质粒pKLKRT(含prcK∷Tetr基因),将其电转化进入L.paracasei HD1.7中,使prcK∷Tetr基因同源重组到L.paracasei HD1.7的染色体上,通过四环素耐药、氨苄青霉素敏感等特性筛选出含有prcK∷Tetr基因的新L.paracasei HD1.7.结果表明,经聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)验证及酶切验证后确定质粒pKLKRT构建成功,并成功转化入L.paracasei HD1.7中,经PCR确认L.paracasei HD1.7 prcK基因缺失突变株构建成功.该突变株产生的细菌素效价比出发菌株低23.61％.采用同源重组方法成功构建L.paracasei HD1.7 prcK基因缺失突变株,为研究L.paracasei HD 1.7群体效应相关基因的分子机理奠定基础.