CEP55慢病毒表达载体构建和U251-CEP55细胞株的建立

• 作者: 姬广全 李风 金丹 高殿帅 高玥
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: CEP55基因 慢病毒载体 U251细胞
• 年，卷（期）: 2017,（33）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 6422-6426,6421
• 页数: 6页
• 分类号: R-33|Q78|R739.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2017.33.005

摘要

目的:构建CEP55慢病毒表达载体,建立稳定表达CEP55的人脑胶质瘤U251细胞株.方法:使用PCR扩增方法将CEP55基因序列进行扩增,转入质粒中,并整合到载体上,构建重组质粒GV358-CEP55载体.与pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞使其产生慢病毒,以GV358空载体包装的慢病毒作为对照.显微镜观察绿色荧光蛋白GFP表达强度,确定慢病毒的感染效率.采用病毒梯度稀释法测定病毒滴度.慢病毒感染人胶质瘤细胞株U251后,经嘌呤霉素筛选出稳定表达CEP55基因的细胞株U251-CEP55.qRT-PCR和Western blot两种方法分别检测CEP55 mRNA及蛋白的表达.结果:测序证实慢病毒表达载体GV358-CEP55构建成功;转染293T细胞获得高滴度的病毒.病毒感染U251细胞后,使用嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞株U251-CEP55;qRT-PCR和Western blot方法分别检测后发现,U251-CEP55细胞株中CEP55 mRNA和蛋白水平的表达明显高于对照组.结论:成功构建CEP55慢病毒表达载体,获得稳定表达CEP55的人胶质瘤U251细胞株,为CEP55基因功能的探究给予了一定的实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金丹		7	2	1.0	1.0
2	高殿帅	徐州医科大学解剖学和神经生物学教研室	24	25	3.0	4.0
3	李风	徐州医科大学细胞生物学与神经生物学教研室	8	3	1.0	1.0
4	高玥	徐州医科大学基础医学院	2	0	0.0	0.0
5	姬广全	徐州医科大学临床医学院	2	0	0.0	0.0