NPAS2基因敲除的HepG2细胞系构建及其对肝癌细胞凋亡的影响

• 作者: 刘峰舟 刘明莉 宋子煜 张洪新 李嘉琦 李波 杨懿 牟佼
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR/Cas9 NPAS2 生物节律 基因敲除
• 年，卷（期）: 2017,（29）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 5618-5622
• 页数: 5页
• 分类号: R-33|Q78|R735.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2017.29.004

摘要

目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建生物节律基因NPAS2敲除的HepG2肝癌细胞系,并初步探讨NPAS2基因敲除对肝癌细胞凋亡的影响.方法:利用sgRNA在线设计工具,针对NPAS2设计两条sgRNA;利用PX459质粒构建分别合有两条sgRNA的敲除载体PX459-sgRNA1;PX459-sgRNA2;利用T7核酸内切酶I检测两条sgRNA活性;将活性较高的打靶载体瞬时转染HepG2细胞,经过药物筛选,克隆化培养及基因测序后得到NPAS2敲除的HepG2肝癌细胞系;利用Western blot检测NPAS2蛋白的表达和凋亡相关蛋白Caspase3的活化;利用流式细胞仪检测敲除细胞系的凋亡水平.结果:成功构建了针对NPAS2的打靶载体;并筛选得到了活性较高的打靶载体;经过药物筛选和克隆化培养得到的NPAS2敲除肝癌细胞系未检测到NPAS2蛋白的表达;进一步发现NPAS2敲除的肝癌细胞Caspase3明显活化,凋亡水平显著升高.结论:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了NPAS2基因敲除的HepG2肝癌细胞系,并发现NPAS2敲除可以促进肝癌细胞凋亡,为进一步研究生物节律基因NPAS2及其它相关基因在肝癌发生发展中的作用机制提供了有力的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张洪新	第四军医大学唐都医院疼痛科	96	971	17.0	28.0
2	李波	第四军医大学唐都医院疼痛科	45	254	10.0	13.0
3	牟佼	西安市中心医院血液病研究所	11	15	3.0	3.0
4	刘明莉	宝鸡市第二中医医院呼吸内分泌科	3	9	2.0	3.0