抗克百威单链抗体的可溶性表达、纯化与鉴定

• 作者: 刘姚 张瑾如 李家冬 沈兴 王弘 詹屋强 黄宇婷
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 克百威 单链抗体 分泌表达 纯化 鉴定
• 年，卷（期）: 2017,（20）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 77-82,89
• 页数: 7页
• 分类号: TS201.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2017.20.015

摘要

在前期获得了抗克百威单链抗体基因的基础上,为进一步研究克百威单链抗体的性质,本文构建了两种抗克百威单链抗体可溶表达载体,pET22b(+)-C-6His-CBF-scFv和pET22b(+)-N-6His-CBF-scFv 比较His标签处于不同位置时,目的蛋白与Ni结合作用,发现His标签处于N端的目的蛋白与Ni结合作用比His标签处于C端时要强.对影响N-6His-CBF-scFv可溶性表达的条件进行优化,进而对其进行纯化.结果表明,当选用LB培养基,表达温度18℃,表达时间为16 h,IPTG浓度为1 mmol/L时可溶表达效果最好,可溶表达的目的蛋白量占总目的蛋白量从优化前的10％增加到50％.优化表达后的N-6His-CBF-scFv破壁上清经Ni Sepharose HP金属螯合亲和层析及阳离子交换层析两步纯化,纯化后纯度达90％.经icELISA鉴定,抗克百威单链抗体保持抗原结合活性,IC50值为63.80 ng/mL.获得的抗克百威单链抗体可用于后续特性研究.