基于SOE-PCR的核酸疫苗pIRES2-MLAA34-HSP70的构建及免疫效果研究

• 作者: 吕扬 张东红 王婉莹 范业宁 赵佳琪 赵臣 马春平
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 疫苗,DNA 重叠延伸PCR 白血病,单核细胞,急性 MLAA-34 热休克蛋白质类70
• 年，卷（期）: 2017,（19）
• 所属期刊栏目: 论著·基础研究
• 页码范围: 2612-2614
• 页数: 3页
• 分类号: R733.7
• 字数: 3694字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2017.19.006

摘要

目的 构建pIRES2-MLAA34-HSP70重组质粒,并检测其免疫效果.方法 采用逆转录PCR(RT-PCR)的方法提取急性单核细胞白血病相关抗原基因MLAA-34和热休克蛋白(HSP) 70基因,设计特异性重叠引物,以重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术扩增MLAA34-HSP70融合基因,构建核酸疫苗pIRES2-MLAA34-HSP70.将核酸疫苗免疫BALB/c小鼠,检测小鼠脾淋巴细胞对U937细胞的杀伤作用及小鼠脾细胞悬液中白细胞介素(IL)-2、IL-4和γ干扰素(IFN-γ)水平.结果 扩增出MLAA34-HSP70融合基因2 956 bp,成功构建了核酸疫苗pIRES2-MLAA34-HSP70,经鉴定与预期结果一致;脾淋巴细胞杀伤活性结果显示,核酸疫苗pIRES2-MLAA34-HSP70对U937细胞的杀伤效率明显高于其他实验组及对照组(P＜0.01);核酸疫苗pIRES2-MLAA34-HSP70组细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ水平亦明显高于其他实验组及对照组(P＜0.01).结论 成功构建了pIRES2-MLAA34-HSP70核酸疫苗,该核酸疫苗能诱发强烈的体液免疫,增强机体对肿瘤细胞的免疫应答,对MLAA34阳性细胞具有特异性杀伤作用.