Western blot免疫印迹法检测磷酸化蛋白表达条件优化研究

• 作者: 尹磊淼 庞雨 徐玉东 杨永清 段婷婷 王宇 韩晓杰
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 蛋白质免疫印迹法 半干转印 湿转 抗原抗体比例
• 年，卷（期）: 2017,（21）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 4047-4050,4037
• 页数: 5页
• 分类号: R446.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2017.21.011

摘要

目的:探讨Western blot免疫印迹法不同转膜方法和不同抗原抗体比例对磷酸化蛋白表达的检测效果.方法:选择肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)及其磷酸化蛋白作为研究对象,比较半干转印法、湿转法和1∶3000、1∶5000、1∶10000等抗体稀释比例对磷酸化蛋白检测效果的影响.结果:半干转印法(恒压16V,30 min)观察到蛋白信号断续;而同样样品利用湿转法(恒压130V,1h)检测发现信号连续且强度明显增高;对于磷酸化蛋白,半干转印法无法观察到磷酸化蛋白信号;而同样样品湿转法检测出现连续信号.统一利用湿转方法进行后续蛋白磷酸化检测,当抗体稀释比为1∶3000时,结果出现非特异性条带;降低抗体稀释比为1∶5000时无非特异性条带,且蛋白信号效果较好;抗体稀释比为1∶10000时条带图像出现弥散且背景较高.结论:选择合适的转膜方式和抗原抗体比例有助于磷酸化蛋白表达检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	尹磊淼		26	75	5.0	7.0
2	徐玉东		26	76	5.0	7.0
3	王宇		47	201	7.0	13.0
4	杨永清		40	204	7.0	13.0
5	韩晓杰		3	8	1.0	2.0
6	段婷婷		5	15	2.0	3.0
7	庞雨		3	8	1.0	2.0