慢病毒载体介导HIF1α稳定表达A549细胞系构建

• 作者: 刘季春 吴霞 周学亮 詹宇亮 赖松青 邹斌 陈紫晴
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: HIF1α 慢病毒载体 稳定表达 A549
• 年，卷（期）: 2017,（20）
• 所属期刊栏目: 论著·基础研究
• 页码范围: 2744-2746,2750
• 页数: 4页
• 分类号: R734.2
• 字数: 3439字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2017.20.003

摘要

目的 利用慢病毒载体系统构建稳定表达HIF1α的A549细胞系.方法 以NCBI人HIF1α基因编码序列为模板,设计并合成引物,PCR法扩增HIF1α.酶切回收的HIF1α片段与制备的慢病毒载体HBLV-RFP-Puro重组反应.PCR和基因测序鉴定重组质粒.重组质粒和辅助质粒共转染293T细胞.包装好的病毒经过滤、浓缩后,利用稀释计数法测定病毒滴度.制备好的慢病毒感染A549细胞,采用药物筛选稳定转染细胞系.荧光显微镜及Western blot检测观察转染及筛选效果.结果 PCR扩增HIF1α片段经鉴定成功,重组质粒经PCR、基因测序鉴定构建成功.成功包装获得高滴度LV-HIF1α.LV-HIF1α感染A549细胞后经药物筛选,荧光显微镜下细胞带有红色荧光,Western blot结果显示LV-HIF1α组HIF1α的表达水平明显高于对照组.结论 慢病毒载体介导HIF1α稳定表达的A549细胞系构建成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周学亮	南昌大学第一附属医院心胸外科	24	62	4.0	7.0
2	刘季春	南昌大学第一附属医院心胸外科	73	226	8.0	11.0
3	吴霞	南昌大学第一附属医院心胸外科	5	7	2.0	2.0
4	赖松青	南昌大学第一附属医院心胸外科	7	3	1.0	1.0
5	邹斌	南昌大学第一附属医院心胸外科	8	20	2.0	4.0
6	詹宇亮	南昌大学第一附属医院心血管内科	2	0	0.0	0.0
7	陈紫晴	南昌大学第一附属医院心胸外科	1	0	0.0	0.0