大肠杆菌Ⅱ型丙酮酸激酶的表达· 纯化及鉴定

• 作者: 周贤轩 赵龙
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: Ⅱ型丙酮酸激酶 蛋白表达 高效液相色谱 大肠杆菌 ATP再生系统
• 年，卷（期）: 2017,（25）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 142-144,174
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3936字
• 语种: 中文

摘要

[目的]获得大肠杆菌的Ⅱ型丙酮酸激酶.[方法]首先用MEGA7软件对不同生物丙酮酸激酶的编码基因进行聚类分析;通过聚合酶链式反应(PCR)扩增了大肠杆菌的Ⅱ型丙酮酸激酶基因pykA,将其克隆到pET28a载体中,构建了重组质粒载体pET28a-pykA并在大肠杆菌BL21中实现了Ⅱ型丙酮酸激酶(PykA)的高效表达;利用镍柱亲和层析系统纯化了PykA蛋白,并进行了高效液相色谱(HPLC)检测.[结果]聚类分析结果表明,大肠杆菌Ⅱ型丙酮酸激酶与其他原核生物的丙酮酸激酶氨基酸序列具有高度同源性.HPLC检测发现Ⅱ型丙酮酸激酶PykA在体外可以高效地将ADP转化为ATP.[结论]该研究获得了Ⅱ型丙酮酸激酶,为ATP的合成以及Ⅱ型丙酮酸激酶为基础的ATP再生系统的研究提供了参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵龙	合肥工业大学生物与食品工程学院	4	6	1.0	2.0
2	周贤轩	合肥工业大学生物与食品工程学院	4	1	1.0	1.0