黄肿树JcFATA基因原核表达载体构建及表达体系优化

• 作者: 刘国选 刘颖 吴东霖 周开源 唐家年 杨亚利 林诗婉 陈建平 高美芳 黄川腾
• 来源期刊: 现代农业科技
• 学科: 农学
• 关键词: 黄肿树 JcFATA基因 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2017,（19）
• 所属期刊栏目: 林业科学
• 页码范围: 136-139,141
• 页数: 5页
• 分类号: S72|Q75|Q78
• 字数: 6139字
• 语种: 中文

摘要

植物脂酰-酰基载体蛋白硫酯酶A(fatty acyl acyl carrier protien thioesterase,FATA)是脂肪酸积累过程中的关键酶,直接调控脂肪酸的含量与组成.目前有关黄肿树脂酰-ACP硫酯酶A基因(JcFA TA)(GenBank登陆号:EU267122.2)的功能研究还未见报道.对JcFA TA基因进行原核表达是研究JcFA TA基因功能的一种重要手段,而开展这项研究的前提是构建原核表达载体.因此,本研究以黄肿树cDNA为模板克隆出JcFA TA基因原核表达片段,将其连接到带有His标签的原核表达载体pCold I上,将所构建的重组载体pCold I-JcFA TA转入大肠杆菌Rosseta.为了表达更多的可溶性His-JcFATA融合蛋白,本文还探讨了不同IPTG浓度(0.1、0.5、1.0 mmol/L)、不同诱导温度(15、25、37℃)和不同诱导时间(0、15、30 h)对蛋白表达的影响,诱导产物经超声波裂解破碎后,利用SDS-PAGE比较分析融合蛋白表达量,从而确定最佳的表达体系.结果表明,当添加诱导剂IPTG的浓度为0.5 mmol/L,诱导时间为15 h,培养温度为25℃时,可以获得较多的可溶性融合蛋白(His-JcFATA).此外,进行蛋白纯化时发现,在镍柱上进行第5次洗脱时所获得纯化蛋白质量最佳.本研究的结果可为进一步研究JcFA TA基因的功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄川腾		21	42	3.0	6.0
2	刘颖	广东海洋大学农学院	52	201	7.0	12.0
3	刘国选	广东海洋大学农学院	3	1	1.0	1.0
4	杨亚利	嘉应学院医学院	4	4	1.0	2.0
5	唐家年	广东海洋大学农学院	5	2	1.0	1.0
6	周开源	广东海洋大学农学院	1	0	0.0	0.0
7	林诗婉	广东海洋大学农学院	3	1	1.0	1.0
8	高美芳	广东海洋大学农学院	3	1	1.0	1.0
9	吴东霖	广东海洋大学农学院	3	1	1.0	1.0