利用CRISPR/Cas9技术建立斑马鱼Asb11基因敲除品系

• 作者: 万永奇 吴秀山 尹丽阳 彭云 李永青 漆轲婧 罗世锋 陈宇
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 斑马鱼 Asb11基因 CRISPR/Cas9
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 252-259
• 页数: 8页
• 分类号: Q78
• 字数: 3847字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2018.03.010

摘要

Asb11基因被报道与斑马鱼Notch信号的激活有关,本研究室过去的研究显示该基因在心肌和骨骼肌中特异性表达.因此推测Asb11基因可能是心脏发育相关候选基因.为了阐明Asb11基因在斑马鱼心脏发育过程中的作用,本文利用CRISPR/Cas9打靶技术构建敲除Asb11基因的斑马鱼品系.首先在线分析筛选出Asb11基因最适合的打靶位点,然后PCR扩增出Asb11基因gRNA的双链cDNA,再将Asb11基因的gRNA和Hcas9的mRNA共同注射到斑马鱼胚胎Ⅰ细胞期胚胎中.进行打靶的有效性检测,发现Asb11基因的一号外显子出现了碱基的缺失,表明CRISPR/Cas9系统对Asb11基因的敲除是有效的.对其F0代、F1代、F2代进行筛选,成功获得了Asb11基因敲除的斑马鱼品系,为探究Asb11在心脏发育中的作用奠定了基础.