同步检测动物源性成分的四重PCR的条件优化和检出限分析

• 作者: 刘华 吴文惠 唐雪明 李文 王金斌 白蓝 郭陈莉
• 来源期刊: 上海农业学报
• 学科: 医学
• 关键词: 动物源性成分 四重PCR 高通量分析 优化 检出限 食品安全
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 遗传育种·分子遗传学
• 页码范围: 37-44
• 页数: 8页
• 分类号: R155
• 字数: 5513字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15955/j.issn1000-3924.2018.03.08

摘要

为建立肉制品中牛、羊、猪、鸡动物源性成分的快速高效多重PCR检测方法,利用4对牛、羊、猪和鸡源特异性PCR引物(靶基因序列来源于线粒体基因组)对多重PCR反应条件进行优化,并确定该检测方法的检出限.结果表明:四重PCR方法最佳反应条件为牛、羊、猪、鸡源特异性引物浓度分别为0.16μmol/L、0.40μmol/L、0.16μmol/L、0.16μmol/L,退火温度58℃,退火时间45 s,循环次数40.在最佳反应条件下,所建立的牛、羊、猪和鸡4种动物源性成分四重PCR的gDNA检出限为25 pg.应用优化后的四重PCR方法对20份市售肉制品样本进行盲样检测,验证鉴别方法的准确性,结果与现行标准的检测结果一致,掺假率达45%.本试验为该4种动物源性成分的快速检测提供了技术支撑.