Ash2l-1/Ash2l-2在小鼠胚胎干细胞中的表达特异性及互补效应

• 作者: 张仕强 张景龙 范辰 谢晶
• 来源期刊: 遗传
• 关键词: H3K4me3 ASH2L异构体 CRISPR/Cas9 小鼠胚胎干细胞 补偿效应
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 237-249
• 页数: 13页
• 字数: 8890字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16288/j.yczz.17-284

摘要

H3K4me3是一种重要的表观遗传修饰,主要由MLL(mixed lineage leukemia)甲基转移酶复合体催化,对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells, mESCs)自我更新能力的维持具有重要作用.ASH2L是MLL复合体中一个重要的核心亚单位,参与调控 mESCs 中染色质的开放状态.ASH2L 在 mESCs 中有2个异构体:ASH2L-1(80 kDa)和ASH2L-2(65 kDa),且以ASH2L-2的表达为主;而在小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast, MEF)中,只有 ASH2L-1 表达.目前,Ash2l-1 和 Ash2l-2 在 mESCs 中的作用尚不清楚.本文利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,建立了Ash2l-1–/–和Ash2l-2–/–mESCs.通过碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色和qRT-PCR发现,Ash2l-1–/–和Ash2l-2–/–mESCs在碱性磷酸酶、多能性调控转录因子(Oct4、Nanog、Sox2和Klf4)的表达与野生型对照无显著差异.通过拟胚体分化实验,发现Ash2l-1–/–mESCs诱导的拟胚体在Snai2(外胚层标记基因)和 Gata4(内胚层标记基因)的表达上显著低于野生型 mESCs 诱导的拟胚体(P<0.01).通过Western blotting,发现Ash2l-1–/–mESCs中ASH2L-2的表达显著上调(P<0.01),Ash2l-2–/–mESCs中ASH2L-1的表达显著上调(P<0.01),而Ash2l-1–/–和Ash2l-2–/–mESCs中,基因组H3K4me3的表达与野生型对照并无显著差异.这表明Ash2l-1和Ash2l-2之间存在补偿效应.利用JASPAR和KEGG预测分析发现,Ash2l-1和Ash2l-2启动子区分别具有3个和16个潜在的多能性转录因子结合位点,这些转录因子可能介导实现Ash2l-1和Ash2l-2之间的补偿效应.以上结果表明,Ash2l-1和Ash2l-2之间的补偿效应可能参与 mESCs多能性的维持和基因组H3K4me3的调控.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张仕强	西北农林科技大学动物医学院	4	1	1.0	1.0
2	谢晶	西北农林科技大学动物医学院	2	3	1.0	1.0
3	范辰	西北农林科技大学动物医学院	1	1	1.0	1.0
4	张景龙	西北农林科技大学动物医学院	1	1	1.0	1.0