双功能短肽修饰壳聚糖介导miR-140基因修复兔关节软骨损伤的效果

• 作者: 刘庆 孙艳丽 宋伟 张洋洋 彭效祥 王鲁娟 赵荣兰
• 来源期刊: 中华创伤杂志
• 关键词: 微RNAs 软骨 关节 壳聚糖 信号肽
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 246-252
• 页数: 7页
• 字数: 4807字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-8050.2018.03.011

摘要

目的 观察核定位信号肽偶联核激酶底物短肽(NNS)修饰的壳聚糖(CS)(NNS CS)介导人miR-140基因,局部转染促进兔关节软骨损伤修复的效果. 方法 构建GV268-miR-140真核表达质粒,将NNS CS分别与阴性对照质粒GV268及重组质粒GV268-miR-140复合形成NNSCS/GV268及NNS CS/GV268-miR-140复合物.选取健康雄性新西兰大耳白兔18只,单侧右后肢按随机数字表法分成转基因组(A组)、阴性对照组(B组)、假手术组(C组),每组6只.A组与B组均制备股骨滑车全层软骨损伤模型;C组仅暴露股骨滑车关节面.术后1周,A组给予NNSCS/GV268-miR-140复合物,B组给予NNS CS/GV268复合物,C组给予等量等渗盐水,每周2次,持续7周.术后8周末,处死动物并取材.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测缺损区软骨组织内miR-140、Sox9、Aggrecan和Hdac4表达;HE染色、番红O-固绿染色及Aggrecan免疫组化染色评估缺损区软骨修复情况. 结果 RT-qPCR检测结果显示,A组miR-140表达水平(3.16±0.37)较B组(1.00±0.24)和C组(1.24±0.18)明显升高(P＜0.05);A组Sox9表达水平(4.38±0.66)较B组(1.04±0.04)和C组(1.19±0.30)明显上调(P＜0.05);A组Aggrecan表达水平(3.63±0.58)较B组(1.21±0.14)和C组(1.34±0.13)明显上调(P＜0.05).A组Hdac4表达水平(0.37±0.06)较B组(0.81±0.06)明显下调(P＜0.05).HE染色、番红O-固绿染色及Aggrecan免疫组化染色显示,A组缺损处呈现明显的软骨性修复,B组缺损处出现大量纤维组织增生和炎性细胞浸润,未见软骨性修复. 结论 NNSCS可携带外源基因进入软骨细胞并在局部大量表达;高表达的miR-140可能通过上调Aggrecan和Sox9表达及下调Hdac4表达,从而明显促进损伤软骨的修复,可为其今后用于治疗软骨损伤提供实验基础.