瞬时过表达ThCBL4基因提高刚毛柽柳耐盐能力

• 作者: 刘中原 唐绯绯 邹全程 高彩球
• 来源期刊: 林业科学研究
• 关键词: 刚毛柽柳 ThCBL4基因 耐盐 瞬时表达
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 页码范围: 60-67
• 页数: 8页
• 分类号: S718.46
• 语种: 中文
• DOI: 10.13275/j.cnki.lykxyj.2018.03.009

摘要

[目的]本研究拟从刚毛柽柳(Tamarix hispida)中克隆获得1个ThCBL4基因,研究该基因的耐盐功能.[方法]以"Calcineurin B-like protein"作为关键词,对实验室前期构建的刚毛柽柳转录组序列进行比对查找获得ThCBL4基因cDNA序列,并通过RT-PCR和测序验证克隆获得的ThCBL4基因序列.利用生物信息学工具进行序列分析.利用Real time RT-PCR分析了0.4 mol·L-1 NaCl、20%(w/v)PEG6000和100μmol·L-1 ABA胁迫处理后ThCBL4基因在刚毛柽柳根和叶中的表达情况.为了进一步分析ThCBL4基因的耐盐功能,构建了植物过表达载体pROKⅡ-ThCBL4,抑制表达载体pFGC5941-ThCBL4,并进行柽柳瞬时转化,同时以pROKII瞬时侵染柽柳作为对照.分析比较NaCl胁迫后瞬时转化柽柳POD、SOD酶活性、MDA含量和DAB、NBT及Evans blue染色情况,以综合评定ThCBL4基因的耐盐功能.[结果]ThCBL4基因cDNA长度为1432 bp,编码区长度675 bp,编码224个氨基酸,编码蛋白分子量为25.57 kDa,理论等电点为5.0.3种不同环境处理后,ThCBL4基因在刚毛柽柳根中均为上调表达,在刚毛柽柳叶中均为下调表达.对盐胁迫后瞬时表达柽柳ThCBL4基因的表达分析显示,成功获得瞬时过表达(标记为OE)、抑制表达(标记为RNAi)转基因株系.进一步的生理指标和生理染色结果显示,盐胁迫下过表达ThCBL4植株的保护酶类SOD与POD活性明显高于对照和抑制表达株系.NBT和DAB染色结果显示,过表达植株的O·-2和H2 O2含量明显低于对照,抑制表达植株的O·-2和H2 O2含量明显高于对照;而Evans blue染色和MDA含量测定结果显示,与对照相比,过表达ThCBL4植株着色更浅、MDA含量更低,而抑制表达ThCBL4植株着色更深、MDA含量更高.[结论]ThCBL4基因可能参与了刚毛柽柳的耐盐胁迫应答,瞬时过表达ThCBL4基因通过提高植株的保护酶活性,降低活性氧氧化程度和细胞损伤的程度,从而提高了转基因刚毛柽柳的耐盐能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邹全程	东北林业大学林学院	8	31	3.0	5.0
3	高彩球	东北林业大学林学院	15	40	4.0	5.0
6	唐绯绯	东北林业大学林学院	3	8	2.0	2.0
7	刘中原	东北林业大学林学院	3	5	2.0	2.0