牙鲆NOD2基因的表达分析及 在抗迟缓爱德华氏菌感染过程中的功能

• 作者: 于海洋 刘金相 张全启 曹丹丹 王志刚 王旭波 齐洁
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 牙鲆 模式识别受体 NOD2 迟缓爱德华氏菌 牙鲆鳃细胞系
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 53-64
• 页数: 12页
• 分类号: Q75
• 字数: 7363字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19663/j.issn2095-9869.20170410001

摘要

本研究利用实验室已建牙鲆(Paralichthys olivaceus)转录组数据库预测得到牙鲆NOD2基因(PoNOD2),并利用PCR技术进行序列验证.同时,设计迟缓爱德华氏菌注射感染牙鲆成鱼和体外免疫刺激牙鲆鳃细胞系实验,探究PoNOD2基因在抗菌免疫反应中的作用.PoNOD2基因的开放阅读框长度为2964 bp,编码988个氨基酸.PoNOD2蛋白有3种保守结构域,包括C-末端LRR,中心NACHT和N-末端CARD结构域.实时荧光定量PCR结果显示,在所检测牙鲆组织中,迟缓爱德华氏菌的侵染能显著上调PoNOD2的表达.体外免疫刺激牙鲆鳃细胞系实验显示,在PGN、PolyⅠ:C和迟缓爱德华氏菌刺激下,PoNOD2表达上调.亚细胞定位显示,PoNOD2蛋白定位于牙鲆鳃细胞的细胞质中.在迟缓爱德华氏菌侵染牙鲆鳃细胞过程中,PoNOD2基因的过表达能够抑制细菌生长,并引起IL-1β、IL-6和IL-8等炎性细胞因子的表达上调.结果表明,PoNOD2在抑制迟缓爱德华氏菌生长以及调节牙鲆对病原菌的免疫应答中发挥重要作用.