miR-124靶向抑制NFATc1调控小鼠C3H10T1/2细胞软骨分化的研究

• 作者: 彭建强 李亚杰 林昆 邹学农 靳松 黄爱军
• 来源期刊: 新医学
• 关键词: 微小核糖核酸-124 骨髓间充质干细胞 软骨分化 活化T细胞核因子c1
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 36-41
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9802.2018.01.008

摘要

目的 研究miR-124是否通过调控预测的靶基因活化T细胞核因子c1(NFATc1)表达调节小鼠C3H10T1/2细胞的软骨分化.方法 培养C3H10T1/2细胞,行软骨诱导分化,采用实时定量PCR和蛋白免疫印迹法检测NFATc1和软骨标记基因Aggrecan、CollagenⅡ、Collagen X mRNA及蛋白的表达水平.使用在线靶基因预测软件预测NFATc1 mRNA的3’端非翻译区(3'UTR)结合位点,构建NFATc1 3'UTR野生型及突变型的荧光素酶报告载体,检测双荧光素酶报告基因,观察miR-124对NFATc1 3'UTR荧光素酶活性的影响.转染miR-124模拟物或抑制物并进行软骨诱导,观察miR-124对NFATc1的调控作用.结果 与诱导前比较,成软骨诱导组软骨分化相关基因Aggrecan、Col2a1和Col10a1 mRNA表达水平升高(P均＜0.01);Sox9和NFATc1 mRNA表达水平随着软骨分化进展而增加(P均＜0.001);Col2a1、Sox 9和NFATc1蛋白呈逐渐增强表达,而肥厚性标记Col10a1蛋白显示较稳定表达.NFATc1 mRNA的3'UTR与miR-124的种子区存在理论上的互补碱基配对序列.转染NFATc1野生型质粒的C3H10T1/2细胞中,加入miR-124模拟物者的荧光素酶活性低于加入miR-124抑制物者,加入miR-124抑制物者的蛋白表达强于加入miR-124模拟物者(P均＜0.05);转染NFATc1突变型质粒的C3H10T1/2细胞中,加入miR-124模拟物与加入miR-124抑制物的荧光素酶活性无变化(P＞0.05).蛋白免疫印迹法与实时定量PCR结果均显示,转染miR-124组与si-NFATc1组的NFATc1表达水平低于Control组(P均＜0.01),miR-124组与si-NFATc1组的NFATc1表达水平相近(P＞0.05).过表达miR-124后,NFATc1大约降低了60％,而这种降低可被miR-124抑制物逆转.转染N FATc1野生型质粒的miR-124模拟物组的NFATc1荧光素酶活性减低(P均＜0.05),转染NFATc1突变型质粒的miR-124模拟物组NFATc1荧光素酶活性无变化(P均＞0.05).结论 miR-124通过抑制靶基因NFATc1的表达调控C3H10T1/2细胞软骨分化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邹学农	中山大学附属第一医院骨科	47	196	8.0	10.0
2	靳松	中山大学附属第八医院骨科	11	32	3.0	5.0
3	李亚杰	中山大学附属第八医院骨科	8	9	2.0	2.0
4	黄爱军	中山大学附属第八医院骨科	10	15	3.0	3.0
5	林昆	中山大学附属第八医院骨科	6	15	3.0	3.0
6	彭建强	中山大学附属第八医院骨科	1	2	1.0	1.0