微小RNA-34a对沉默信息调节因子1的调节作用及该因子对严重烧伤大鼠早期心肌损伤的影响

• 作者: 何亭 刘洋 张家宁 张聚磊 曹梦远 白晓智 石继红 胡大海 苏琳琳 蔡维霞 贾艳慧
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 关键词: 烧伤 心肌疾病 细胞凋亡 微小RNA-34a 沉默信息调节因子1 炎症反应
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 烧伤休克
• 页码范围: 21-28
• 页数: 8页
• 字数: 6658字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2018.01.005

摘要

目的 探讨微小RNA-34a对沉默信息调节因子1(SIRT1)的调节作用及SIRT1对严重烧伤大鼠早期心肌损伤的影响. 方法 (1)将24只SD大鼠按照随机数字表法(分组方法下同)分为假伤组、单纯烧伤组和SIRT1激动剂组,每组8只.单纯烧伤组、SIRT1激动剂组大鼠背部造成30％体表总面积Ⅲ度烫伤(以下称烧伤),假伤组大鼠背部致假伤.伤后即刻,假伤组、单纯烧伤组大鼠腹腔注射生理盐水50 mL/kg,SIRT1激动剂组大鼠腹腔注射生理盐水50 mL/kg+1 mg/mL白藜芦醇(50 mg/kg).伤后6h,抽取腹主动脉血制备血清,取心肌组织.(2)取12只SD大鼠乳鼠心肌细胞,分为微小RNA-34a模拟物对照组、微小RNA-34a模拟物组、微小RNA-34a抑制物对照组及微小RNA-34a抑制物组,分别用微小RNA-34a的模拟物对照、模拟物、抑制物对照、抑制物序列进行转染.实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌细胞微小RNA-34a表达,蛋白质印迹法检测心肌细胞SIRT1的蛋白表达.另取心肌细胞,分为微小RNA-34a抑制物对照+烧伤血清组、微小RNA-34a抑制物+烧伤血清组及微小RNA-34a抑制物+烧伤血清+EX527组.微小RNA-34a抑制物对照+烧伤血清组心肌细胞转染微小RNA-34a抑制物的对照序列,后2组心肌细胞转染微小RNA-34a抑制物序列.转染48 h,微小RNA-34a抑制物+烧伤血清+EX527组心肌细胞用含体积分数10％的单纯烧伤组大鼠血清+终物质的量浓度为1 mol/L EX527的DMEM培养液培养6h,其余2组心肌细胞用含体积分数10％的单纯烧伤组大鼠血清的DMEM培养液培养.蛋白质印迹法检测心肌细胞SIRT1及剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、Bax的蛋白表达.(3)取来自(1)的心肌组织,实时荧光定量RT-PCR法检测假伤组和单纯烧伤组大鼠心肌组织中微小RNA-34a及SIRT1的mRNA表达;生物图像导航仪下观察假伤组、单纯烧伤组和SIRT1激动剂组大鼠心肌组织形态;实时荧光定量RT-PCR法检测假伤组、单纯烧伤组和SIRT1激动剂组大鼠心肌组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达;蛋白质印迹法检测假伤组、单纯烧伤组和SIRT1激动剂组大鼠心肌组织剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和Bax的蛋白表达.对数据行单因素方差分析及LSD检验. 结果 (1)转染48 h后,微小RNA-34a模拟物组心肌细胞微小RNA-34a的表达量为4.67±0.92,显著高于微小RNA-34a模拟物对照组的1.03 ±0.04(P＜0.01);微小RNA-34a模拟物组心肌细胞SIRT1的蛋白表达量为0.35 ±0.06,显著低于微小RNA-34a模拟物对照组的1.12±0.11(P＜0.01).转染48 h后,微小RNA-34a抑制物组心肌细胞微小RNA-34a表达量为0.26 ±0.07,低于微小RNA-34a抑制物对照组的1.33±0.07(P＜0.01);微小RNA-34a抑制物对照组心肌细胞SIRT1的蛋白表达量为1.12 ±0.16,显著低于微小RNA-34a抑制物组的1.74±0.34(P＜0.01).培养6h后,与微小RNA-34a抑制物对照+烧伤血清组比较,微小RNA-34a抑制物+烧伤血清组心肌细胞SIRT1蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、Bax蛋白表达水平显著降低(P＜0.05).与微小RNA-34a抑制物+烧伤血清组比较,微小RNA-34a抑制物+烧伤血清+EX527组心肌细胞SIRT1的蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05);剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、Bax蛋白表达水平显著升高(P＜0.05).(2)伤后6h,与假伤组比较,单纯烧伤组大鼠心肌组织微小RNA-34a表达显著升高(P＜0.01);SIRT1的mRNA表达量明显降低(P＜0.01).伤后6h,假伤组大鼠心肌细胞排列整齐,细胞核形态正常,未见炎性细胞浸润;单纯烧伤组大鼠心肌细胞排列紊乱,细胞核消失或形态异常,炎性细胞浸润明显;SIRT1激动剂组大鼠心肌细胞排列整齐,细胞核形态正常,少量炎性细胞浸润.伤后6h,与单纯烧伤组比较,假伤组、SIRT1激动剂组大鼠心肌组织IL-1β、TNF-α的mRNA表达量及剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和Bax蛋白水平显著降低(P＜0.01). 结论 严重烧伤大鼠早期心肌组织微小RNA-34a表达升高,导致SIRT1表达降低,IL-1β、TNF-α及剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、Bax表达升高,心肌损伤明显.SIRT1活化后,可通过降低IL-1β、TNF-α及剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、Bax的表达,减轻大鼠严重烧伤早期诱发的心肌损伤.