Ⅰ型马立克病毒UL24蛋白的原核表达及其亚细胞定位的研究

• 作者: 吴佳燕 周忠文 崔治中 张言坤 苏帅 韩妮
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 农学
• 关键词: Ⅰ型马立克病毒(MDV) UL24基因 多克隆抗体 鉴定 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 动物病毒研究论著
• 页码范围: 67-74
• 页数: 8页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

为研究Ⅰ型马立克病毒(MDV) UL24蛋白的亚细胞定位,以MDV GX0101为模板,PCR扩增UL24基因全长,分别克隆到原核表达载体pGEX-6P-1、pET-32a(+)和真核表达载体pEGFP-C1中.将原核表达重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中表达,并进行纯化和鉴定.用纯化蛋白免疫Balb/c小鼠,制备并鉴定抗UL24蛋白的多克隆抗体.通过间接免疫荧光试验(IFA)检测感染GX0101的鸡胚成纤维细胞(CEF)中的UL24蛋白.同时,将真核表达重组质粒pEGFP-C1-UL24转染CEF细胞,通过激光共聚焦显微镜观察UL24蛋白在CEF中的亚细胞定位.结果显示Ⅰ型MDV的UL24基因在原核表达载体中能够正确表达,免疫小鼠后获得抗UL24蛋白的多克隆抗体.该抗体可特异性识别MDV UL24蛋白,且MDV UL24蛋白在CEF的细胞质和细胞核中定位,以上研究结果为进一步研究MDV UL24基因的功能奠定基础.