京尼平交联羊膜生物支架的生物物理特性

• 作者: 吕莎 尹燕锋 李云川 李兰 杨柳 涂秋芬 管峥 苏文君
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 羊膜 交联剂/药物 应力 抗张强度 脐带间充质干细胞 生物相容性 京尼平
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 107-112
• 页数: 6页
• 字数: 5575字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2018.02.007

摘要

目的 探讨京尼平交联羊膜作为生物支架的生物特性及可行性. 方法 获取新鲜脐带,采用贴壁法分离培养人脐带间充质干细胞(hUCMSCs).采用流式细胞技术测定细胞表面标志物PE-CD34、PE-CD45、PE-CD90、FITC-105和FITC-Oct-4单克隆抗体及鉴定细胞.取第3代hUCMSCs进行成脂、成骨诱导培养,分别用茜素红和油红O染色鉴定.无菌条件下取健康剖宫产羊膜,将修剪的组织块固定于硝酸纤维素膜并按照京尼平质量浓度、交联温度和时间的不同分为12个组,分析质量分数0.5％、1％京尼平在37℃、45℃条件下交联羊膜24、36和48 h后羊膜的最大拉伸位移和最大载荷.将hUCMSCs分为hUCMSCs组、新鲜羊膜组(孔板中铺上新鲜羊膜后加入hUCMSCs进行培养)、交联羊膜组、交联羊膜+明胶组和明胶组,分别按照分组在培养孔中铺上相应物质对hUCMSCs进行培养,采用羟脯氨酸试剂盒检测各组交联羊膜中羟脯氨酸含量.于培养后第3天采用MTT法检测各组细胞增生值(吸光度,A值)以评估交联羊膜的生物相容性. 结果 与0.5％京尼平交联羊膜相比,1％京尼平交联羊膜最大拉伸位移减小[(8.31±0.43) mm与(4.49±0.37) mm],差异有统计学意义(t=6.785,P＜0.05).0.5％京尼平在37℃和45℃条件下交联24 h羊膜最大拉伸位移分别为(9.89±1.09)mm和(5.39±0.59)mm,差异有统计学意义(t=6.389,P＜0.05);0.5％京尼平在37℃条件下交联24、36和48 h羊膜最大拉伸位移逐渐减小,但差异无统计学意义(P＞0.05).与0.5％京尼平交联羊膜相比,1％京尼平交联羊膜最大载荷增大[(3.94±0.31)N与(5.19±0.27)N],差异有统计学意义(t=3.034,P＜0.05).0.5％京尼平在45℃条件下交联24 h羊膜载荷明显高于37℃条件下,差异有统计学意义(t=5.528,P＜0.05).1％京尼平交联羊膜、0.5％京尼平交联羊膜和新鲜羊膜中羟脯氨酸质量分数分别为(1.28±0.36)、(2.03±0.49)和(2.11±0.10) mg/g,1％京尼平交联羊膜中羟脯氨酸质量分数明显低于0.5％京尼平交联羊膜和新鲜羊膜,差异均有统计学意义(均P＜0.05).新鲜羊膜组、明胶组和hUCMSCs组培养3d后细胞增生值均明显低于交联羊膜组和交联羊膜+明胶组,差异均有统计学意义(均P＜0.05),交联羊膜组与交联羊膜+明胶组间细胞增生值的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 不同温度、不同交联时间和不同质量分数京尼平均影响交联羊膜的力学特性,交联羊膜的细胞毒性小,可塑性更好,有望作为人工角膜的载体支架.