华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021脂肪酶基因的分子改造及酶学特性的探究

• 作者: 吴倩 苗华彪 蒋蕊 韩楠玉 黄遵锡
• 来源期刊: 工业微生物
• 关键词: 脂肪酶 华根霉 分子改造 定点突变 酶学特性
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究与应用
• 页码范围: 31-39
• 页数: 9页
• 字数: 6078字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2018.03.005

摘要

本文对华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021脂肪酶(r27RCL)的氨基酸序列(A149C、V180C和F196C)进行定点突变.以未突变的野生型脂肪酶r27RCL作为对照,借助pPIC9K载体表达系统将野生脂肪酶及突变体在GS115中实现异源表达,并研究野生型脂肪酶r27RCL及突变体的酶学性质.结果表明,三个单突变体均不能与氨基酸残基C177形成二硫键,但是突变体r27RCL-V180C最大催化效率是野生型脂肪酶r27 RCL的1.43倍,与不同碳链长度的p-NP(p-硝基苯酚)底物亲和力也相对提升,酶最适反应温度降低5℃.突变体r27RCL-A149C和r27RCL-F196C较野生型具有更宽的pH作用范围.本文研究为探究华根霉来源的脂肪酶蛋白空间结构及酶基因改造提供了理论依据.