褐飞虱中肠上皮细胞膜结合氨肽酶N在Sf9昆虫细胞内的表达

• 作者: 关雄 张娇 林莉 邵恩斯 陈雪琳 黄天培
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 褐飞虱 氨肽酶N(APN) Sf9 免疫荧光定位
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 839-848
• 页数: 10页
• 分类号: S186|Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.05.012

摘要

褐飞虱(Nilaparvata lugens)是中国水稻(Oryza sativa)生产中对水稻危害极为严重的农业害虫之一.随着微生物杀虫剂苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringsis,Bt)的使用及转Bt杀虫基因作物的推广,对Bt不敏感的褐飞虱的防治将成为难点.当前研究表明Cry毒素与靶标昆虫中肠膜结合氨肽酶N(aminopeptidaseN,APN)的结合是Bt Cry毒素毒理机制中的重要步骤.本研究对褐飞虱转录组数据中获得的一个褐飞虱中肠apn基因进行全长克隆,构建Bacmid-bphAPN重组杆状病毒载体,并在草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)卵巢细胞(sf9)中表达.经Western blot、蛋白质谱及免疫荧光定位检测证实bphAPN蛋白成功表达.细胞毒性实验结果显示表达了褐飞虱中肠APN的Sf9细胞对CrylAc活化蛋白不敏感.褐飞虱中肠APN的体外真核表达有助于褐飞虱中肠APN的特征分析,为开发对褐飞虱有毒性作用的新型Cry毒素提供了资料基础.