g6pd基因在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达

• 作者: 任平平 何志旭 周艳华 夏海雄 李莉 舒莉萍
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 葡糖磷酸脱氢酶缺乏 葡糖磷酸脱氢酶 原位杂交 DNA,重组 质粒 基因表达 斑马鱼 胚胎发育
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 57-63
• 页数: 7页
• 分类号: R394
• 字数: 4785字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2018.02.08

摘要

目的:观察g6 pd基因在野生型斑马鱼胚胎早期发育过程中的表达情况.方法:利用基因数据库和BLAST软件分别进行g6 pd基因的共线性分析和G6 pd蛋白质序列相似性分析.原位杂交技术观察不同时相斑马鱼胚胎中g6 pd基因的表达;构建g6pd-EGFP-pCS2+重组质粒,并将其显微注射入斑马鱼胚胎内,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达;蛋白质印迹法检测24、48、72 hpf斑马鱼胚胎中G6 pd蛋白的表达量;改良G6 pd定量比值法检测24、48、72 hpf斑马鱼胚胎中G6 pd酶活性.结果:g6 pd基因在进化过程中相对保守,斑马鱼与人类的G6 pd蛋白质相似度为88％,斑马鱼与小鼠的G6 pd蛋白质相似度为87％.原位杂交试验结果显示,g6pd基因主要表达于斑马鱼的造血组织,显微注射g6pd-EGFP-pCS2+重组质粒后观察的结果与原位杂交试验结果一致.24、48、72 hpf斑马鱼胚胎中G6pd蛋白相对表达量分别为1.44±0.03、1.47±0.05、1.54±0.02,差异无统计学意义(P>0.05);G6pd酶活性分别为1.74±0.17、1.75±0.12、1.71±0.22,差异无统计学意义(P>0.05).结论:成功观察到斑马鱼体内g6pd基因表达部位及其变化规律,并测定了不同发育时相斑马鱼胚胎中G6 pd蛋白表达和酶活性,为建立斑马鱼G6 PD缺乏症模型奠定了基础.